تعیین توالی Analyzer

این شرکت با استفاده از دو دستگاه 3130XL-3130) Genetic Analyzer) ساخت ABI آمادگی خود را جهت انجام تعیین توالی نمونه های مختلف (خون، DNA، محصول PCR) طی یک الی دوهفته اعلام می دارد.

انجام عمل Sequencing مستلزم استفاده از نمونه خون، DNA و PCR Product و یا ( Plasmids (Cosmids,BACs می باشد که جهت دریافت نتیجه هرچه بهتر تعیین توالی، رعایت نکات ذیل الزامی می باشد.

1-  لطفا، فرم سفارش تعیین توالی را دانلود نموده، اطلاعات خودرا وارد نموده و برای ما  ارسال نمایید.

2- در هنگام ارسال نمونه ها جهت تعیین توالی ، از ویالهای ml 1.5 استفاده کرده و از بسته شدن کامل درب آنها مطمئن شوید و آنها را با مقدار کافی از پارا فیلم کاملاً ببندید که احتمال تبخیر و یا ریختن نمونه وجود نداشته باشد. سپس توسط ماژیک ضدآب مشخصات نمونه را بطور خوانا روی هریک از نمونه ها بنویسید.

3- قابل توجه است که برای حصول نتیجه بهتر در تعیین توالی، محصول PCR باید کاملاً خالص باشد و هنگامی که نمونه بروی ژل آگارز برده می شود بعد از الکتروفورز ، نباید باند غیر اختصاصی و یا اسمیر مشاهده شود و فقط یک  باند خوب و واضح ملاحظه گردد.

4- در صورت نیاز، شرکت حاضر به انجام خالص سازی(Purification اولیه جهت ازبین بردن هرگونه ناخالصی محصولPCR) نمونه های شما می باشد که در این حالت  باید در فرم سفارش Sequencing ، جهت خالص سازی  نمونه خود کلمه Need را انتخاب نمائید (در غیر اینصورت کلمه Done را انتخاب فرمائید).

5- توجه داشته باشید که پیش از انجام  تعیین توالی نمونه های ارسالی شما، کیفیت نمونه ها وپرایمرها در آزمایشگاه با دستگاه Nano drop بررسی میگردد. بدین ترتیب نمونه هایی که احتمال نتیجه گرفتن در آنها پائین باشد و ضعیف بنظر برسند به اطلاع شخص سفارش دهنده خواهند رسید.

حجم و غلظت لازم جهت ارسال نمونه و پرایمر

1- در صورتی که نمونه شما خالص سازی شده است و نیازی به Purification نداشته باشد، ما نیاز به حجم حدود lμ40 و غلظت (lμ ng/80) از هر نمونه ارسالی شما داریم(غلظت نمونه ارسالی شما بستگی به طول قطعه دارد).

2- در صورتیکه نمونه شما نیاز به خالص سازی  داشته باشد (Purification Needed )، نیاز به حجم حدود 50 lμ از نمونه ارسالی شما داریم (غلظت نمونه ارسالی بستگی به طول قطعه دارد).

3- در صورتی که نمونه ارسالی از Plasmid (فاژ،Bac و...) باشد، ارسال غلظتی حدود (lμ ng/150 ) و حجمی برابر 30 تا lμ 40 نیازاست (بستگی به اندازه قطعه دارد).

4- پرایمر ارسالی شما باید از غلظت pMol 3.2 و حجمlμ 10 از پرایمر لازم است. شایان ذکر است که هنگام فرستادن نمونه های Sequencing در مورد ارسال درست پرایمر ها دقت کامل را مبذول فرمائید.( توجه داشته باشید که پرایمر رقیق شده زودتر از بین می رود و تبخیر می شوند).

5- انتخاب صحیح پرایمر مربوط به نمونه های ارسالی ، به عهده شما بوده و باید پرایمر بهمراه نمونه ها ارسال گردد.(شایان ذکر است که برخی از پرایمرهای یونیورسال در آزمایشگاه موجود می باشد و نیازی به ارسال این پرایمرهاتوسط مشتری نیست.)

6- شرکت زیست فناوری کوثر در صورت نیاز ،توانایی سنتز پرایمرهای مورد نظر مشتریان را نیز دارا میباشد.که برای سفارش پرایمر نیز از طریق وب سایت شرکت در قسمت ORDER گزینه اول را که مربوط به DNA & RNA Synthesis order form است را انتخاب فرموده و اقدام به تکمیل نمودن فرم نمائید.(که در این صورت زمان تهیه پرایمر به زمان تعیین توالی افزوده می گردد).

7- چنانچه طول قطعه شما بیش از 700 و یا 800 باز است (مثلاً 3 kb ) و قصد دارید همه آنرا تعیین توالی کنید ما قادر به انجام Primer Walking هستیم (توجه داشته باشید،حجم و غلظت های ذکر شده در موارد فوق صرفاً جهت بهترین شرایط Sequencing تأکید می گردد و مازاد نمونه ها و پرایمرهای ارسالی در صورت نیاز به مشتریان مرجوع می گردد).