هموگلوبین توتال (درابکین) دستی HAEMOGLOBIN TOTAL زیست شیمی

هموگلوبین توتال (درابکین) دستی HAEMOGLOBIN TOTAL زیست شیمی HAEMOGLOBIN TOTAL اندازه گیری هموگلوبین به روش دستی: روش متداول برای اندازه گیری میزان هموگلوبین روش فتومتری (سیانومت هموگلوبین)، دراین روش غلظت رنگ هموگلوبین بوسیله لیز شدن گلبول های قرمز (شکستن غشای آن ها) برای آزاد کردن هموگلوبین اندازه گیری میشود. وسایل مورد نیار: ۱- دستگاه فتومتر ۲- پیپت مخصوص هموگلوبین که با آن بتوان مقدار دقیق 20 میکرولیتر خون بر داشت ۳- یک عدد لوله مکنده ۴- محلول دارابکین (drobkins) که به صورت کیت آماده در بازارموجود است. محلول دارابکین (drobkins): در روش سیانومت هموگلوبین خون کامل به همراه مادة ضد انعقاد، سیترتتریسدیمدوآبه، (به نسبت2/1-5/1 میلیگرم به ازای هر میلیلیتر خون) تهیه میگردد که این محلول در یخچال 4 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت پایدار و قابل نگهداری است و از محلول درابکین (فریسیانیدپتاسیم و سیانیدپتاسیم) برای رقیق کردن خون استفاده می شود (به نسبت 20میکرولیتر خون به ml 5 درابکین). محلول درابکین: 1- فریسیانیدپتاسیم 2- سیانیدپتاسیم 3- بی کربنات سدیم دترژنت موجود در درابکین rbc ها را لیزمی کند تا hb آزاد گردد و تحت اثرفروسیانید پتاسیم (که جسمی است زرد رنگ به فرمول [fe(cn)6] k4) به مت هموگلوبین تبدیل گردد که ازلحاظ رنگ ترکیبی پایدار بوده و پیک جذبی آن در540نانومتر است. روش کار: کار با نمونه گیری از نوک انگشت آغاز شد. ابتدا نوک انگشت را توسط پنبه آغشته به الکل ضد عفونی می کنیم . بعد توسط یک ضربه لا نست نوک انگشت را سوراخ کرده، خون جریان پیدا می کند و ۲۰ میکرو لیتر خون به وسیله پیپت مخصوص به لوله آزمایش حاوی cc ۵ محلول دارابکین اضافه می کنیم. اسم این لوله را لوله تست نهادیم . سپس سر لوله را توسط پارافیل می بندیم و محلول را همگن می کنیم ده دقیقه زمان می دهیم تا واکنش صورت گرفته و رنگ قهوه ای شفاف ظاهر شود. دستگاه فتومتر را روشن کردیم وطول موج ۵۴۰ نانومتر را روی آن انتخاب نمودیم. دستگاه را بوسیله ماده دارابکین صفر می کنیم به این صورت که در داخل لوله کووت مخصوص دستگاه فتومترمحلول دارابکین می ریزیم کووت را داخل دستگاه فتومتر قرار می دهیم حالا دستگاه را روی عدد صفر تنظیم می کنیم. محتوی کووت را خالی می کنیم .حالا محلول لوله تست را داخل کووت می ریزیم کووت را در دستگاه قرار می دهیم. عددجذب نوری را که دستگاه نمایش می دهد یادداشت می کنیم: میزان هموگلوبین= جذب نوری تست غلظت استاندارد(8/36)